TaqMan分析灵敏检测癌症突变

来源：生物通时间：2012/04/16 14:44 阅读：468

　　去年Life Tech发布的早期计划覆盖了三个基因——KRAS、BRAF和EGFR。如今，检测分析覆盖了另外21个与癌症研究高度相关的基因，包括HRAS、NRAS、PIK3CA、KIT、PTEN和TP53等。

　　一年前，Life Technologies公司宣布推出TaqMan® Mutation Detection Assays。这是一个高度灵敏且新颖的研究工具，能够检测到隐藏在100万个正常拷贝的背景之下的单个突变分子。如今，Life Tech再次扩展其突变检测分析，可检测另外21个癌基因中241个较常见的突变。

　　TaqMan® Mutation Detection Assays可实现异质样本中极低水平突变的筛查，并在3小时内获得结果，而手动操作时间极少。去年Life Tech发布的早期计划覆盖了三个基因——KRAS、BRAF和EGFR。如今，检测分析覆盖了另外21个与癌症研究高度相关的基因，包括HRAS、NRAS、PIK3CA、KIT、PTEN和TP53等。

　　负责新一代qPCR的副总裁及总经理Sam Raha表示：“我们TaqMan突变分析的扩展如今为科研人员提供了非常强大的工具，可准确快速地拷问样本中更大范围的关键癌症突变。在未来，这项技术有潜力评估基于生物标志物的治疗。”

　　TaqMan® Mutation Detection Assays的核心是castPCR。何谓castPCR？它的全称是竞争性等位基因特异的TaqMan聚合酶链式反应（competitive allele-specific TaqMan® polymerase chain reaction）。这是一种新颖的技术，它利用特有的分析设计和试剂来扩增目的突变，同时利用抑制因子来沉默样品中野生型等位基因的扩增。

　　再加上Life Tech金标准的TaqMan探针和引物，Mutation Detection Assays实现了行业中前所未有的灵敏度和特异性。

　　TaqMan® Mutation Detection Assays的特点

　　◆ 高特异性：突变等位基因的检测是基于等位基因特异的引物，而野生型背景由MGB探针阻断剂寡核苷酸所抑制；

　　◆ 高灵敏度：加标实验证明，此分析能够检测野生型gDNA背景中低于0.1%的突变分子；

　　◆ 宽动态范围和出色PCR效率：动态范围高达7个对数期，而PCR平均效率为100 ± 10%；

　　◆ 快速简单的流程：与其他TaqMan分析类似，从样本到结果需要要3个小时，而手动操作时间极少突变分析可以两种方法开展。

　　1）突变等位基因分析结合基因参考分析。这种方法使用较少的孔、样本和试剂，能够确定样品中突变碱基存在与否。

　　2）突变等位基因分析结合野生型等位基因分析。这种方法能够高度准确地定量样品中的突变比例。